預混合飼料中維生素A乙酸酯、維生素D3、維生素E的測定 ——液相色譜法 本方法適用于配合飼料、濃縮飼料、復合預混料飼料、維生素預混合飼料維生素A及維生素D、維生素E的測定。參考標準GB/T17817-2010《飼料中維生素A的測定高效液相色譜法》、 GB/T 17818-2010 《飼料中維生素D3的測定高效液相色譜法》、GB/T 17812-2008 《飼料中維生素E的測定高效液相色譜法》。

1、方法原理 維生素預混料中的維生素A乙酸酯、維生素D3、維生素E（dl-α-生育酚乙酸酯）用甲醇溶液提取，試液注入高效液相色譜柱，用紫外檢測器在275 nm處測定，外標法計算維生素A、維生素D3、維生素E（dl-α-生育酚乙酸酯）含量。 

2、主要儀器設(shè)備 1)液相色譜儀L210，帶紫外檢測器（上海儀電分析儀器有限公司）；

 2)超聲波水浴；

 3)電子天平； 

4)真空抽濾裝置。

 3、實驗方法 

1、混合標樣配置 維生素A乙酸酯、維生素D3、維生素E（dl-α-生育酚乙酸酯）標準貯備液：準確稱取維生素A乙酸酯、維生素D3、維生素E (dl-α-生育酚乙酸酯)各10.0 mg，置于100 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋到刻度，混勻，4℃下保存。該貯備液濃度為0.1 mg/mL。 維生素A乙酸酯、維生素D3、維生素E（dl-α-生育酚乙酸酯）混合標準工作液：準確吸取各標準貯備液若干毫升于10 mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，混勻。 

2、試樣溶液的制備 稱取試樣1.00 g置于100 mL棕色容量瓶中，加入約80 mL甲醇，于 65 ℃超聲波水浴中超聲提取30 min，冷卻至室溫，用甲醇稀釋至刻度，充分搖勻后過0.45 μm濾膜過濾。將試樣溶液進一步稀釋至合適濃度，用于實驗分析。

 3、液相色譜儀參考條件 色譜柱：C18 4.6 mm(i.d)×150mm； 流動相：95%甲醇 流速：1 mL/min； 柱溫：室溫 波長：275 nm； 測定：取相同體積試樣制備液和標準使用液分別注入高效液相色譜儀，根據(jù)保留時間按定性，外標峰面積法定量。

 4、實驗結(jié)果 4.1 混合標準溶液高效液相色譜圖 液相色譜儀 4.2工作曲線的繪制 液相色譜儀 維生素D3工作曲線見下圖，線性相關(guān)系數(shù)：0.9998 液相色譜儀 4.3預混料實際樣品色譜圖 液相色譜儀

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